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不同細胞的凍存液配制比例(凍存液配置注意事項)

更新時間:2024-10-11      點擊次數(shù):246

細胞凍存液是用于在低溫環(huán)境下保存細胞的一種特殊溶液,其主要目的是保護細胞在冷凍和解凍過程中免受損傷。細胞凍存液通常包含滲透性和非滲透性保護劑,如二甲基亞砜(DMSO)和甘油,這些成分可以滲透到細胞內(nèi)部,降低細胞內(nèi)外的電解質(zhì)濃度,防止細胞內(nèi)水分外滲,從而減少冰晶的形成。

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細胞凍存液配置概述

常用的細胞凍存液配比為培養(yǎng)基:血清:DMSO=7:2:1,適用于多數(shù)細胞系,能夠保證細胞在凍存過程中有較高的存活率。需要長時間保存或者具有特別珍貴性的細胞系調(diào)整為血清:DMSO的比例=9:1,這樣可以更好地保護細胞,并確保其在凍存后依然保持較好的生物學特性。

不同細胞凍存液配置比例

大部分的細胞其實并不需要20%或者90%的血清,只需用含有10%血清的培養(yǎng)基來配置成含5%DMSO的溶液即可用于細胞凍存,有的甚至都不需要加血清。

凍存液配置的一些注意事項

? 選擇合適的細胞狀態(tài):應(yīng)選擇處于對數(shù)生長期且細胞匯合度在80%-90%左右的細胞進行凍存操作,以確保細胞在最佳狀態(tài)下進行凍存。

? 細胞密度:凍存時的細胞密度應(yīng)適當,推薦密度為3×10^6到1×10^7細胞/mL。細胞密度過低可能會影響存活率。

? 避免長時間暴露于常溫:細胞懸液加入凍存液后應(yīng)盡量減少在常溫下的放置時間,DMSO在常溫下對細胞有較大的損傷。

? 使用高質(zhì)量的凍存管:確保使用無菌、耐低溫的凍存管,并在分裝時做好標記,以便后續(xù)識別。

? 血清和DMSO的比例:常用的比例為90%血清+10%DMSO或55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%血清+5%DMSO,根據(jù)具體細胞類型和實驗需求進行調(diào)整。

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