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Alexa Fluor 488 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(綠色)使用說明書

發(fā)布時(shí)間:2017/11/17      點(diǎn)擊次數(shù):7003

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Alexa Fluor 488-Phalloidin, Alexa Fluor488 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽

產(chǎn)品名稱

貨號(hào)

規(guī)格

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價(jià)格(元)

Alexa Fluor 488 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(綠色)

C6242L0520

300 T

-20℃

1950

 

產(chǎn)品描述

鬼筆環(huán)肽是從一種菌類Amanita Dhalloides所提取出來的環(huán)肽。它與F-actin競爭性的結(jié)合。熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結(jié)合并且易溶于水,為檢測(cè)組織切片,培養(yǎng)細(xì)胞和無細(xì)胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標(biāo)記方法。

本品為Alexa Fluor488標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽,可發(fā)出高亮度、穩(wěn)定的綠色熒光,染色反應(yīng)特異性強(qiáng),對(duì)比性高,適合用作F-actin的定性和定量檢測(cè)。與Actin抗體比較,Alexa Fluor488 鬼筆環(huán)肽具有如下優(yōu)點(diǎn):1)與actin亞單位一比一結(jié)合,并且不與G-actin結(jié)合,具有比Actin抗體更好的染色效果;2)且本品的結(jié)合沒有物種差異性,適用性廣泛;3)鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的非特異性信號(hào)可忽略,因而圖像的反差較好;4)染色與用于細(xì)胞分析的其他熒光染色*兼容,包括熒光蛋白、Qdot® 納米晶體和其他Alexa Fluor偶聯(lián)物(包含Alexa Fluor偶聯(lián)二抗);5)經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。

技術(shù)資料

1. Ex(nm):493

2. Em(nm):517

3. 分子量:1900

4. 溶劑:DMSO

5. 結(jié)構(gòu)式:

 

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。收到貨后-20℃避光干燥保存,1年有效。

使用方法:

1.   準(zhǔn)備1000x DMSO Alexa FluorTM 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽存儲(chǔ)液

用30µL DMSO 溶解粉末狀A(yù)lexa FluorTM 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽,可按需分裝并于-20℃避光干燥保存,分裝保存,避免反復(fù)凍融。

2.   準(zhǔn)備1x Alexa Fluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液

吸取1µL 1000×Alexa Fluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽存儲(chǔ)液到1ml 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。

注意:不同的細(xì)胞染色狀況不同,相應(yīng)Alexa Fluor 488鬼筆環(huán)肽使用量也需根據(jù)不同情況而定。

3. 細(xì)胞染色步驟

1)細(xì)胞培養(yǎng)過夜或更長,使其密度達(dá)到50-60%匯合度。

2)吸掉培養(yǎng)液,37℃預(yù)熱的1×PBS(pH 7.4)清洗細(xì)胞2次。

3)使用含有3-4%甲醛的PBS溶液進(jìn)行細(xì)胞固定,室溫固定10-30min。

注意:避免固定劑中含有甲醇成分,因?yàn)榧状荚诠潭ㄟ^程中可能破壞肌動(dòng)蛋白。

4)室溫條件下,用PBS清洗固定好的細(xì)胞2~3次,每次10min。

5)(可選):室溫條件下,用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3-5min,從而增加其通透性。

注意:鬼筆環(huán)肽的分子量小,很容易通過細(xì)胞,一般情況下不需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷丙酮和TRITON X-100處理。

6)室溫條件下,用PBS清洗細(xì)胞2~3次,每次10min。

7)每孔加入 Alexa Fluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液100µl/孔(96孔板),室溫避光染色20-90min,夏季時(shí)間相對(duì)短些。

8)用PBS清洗細(xì)胞3次,每次5min,去除掉多余的Alexa Fluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽。

9)(可選):加入足量的即用型DAPI溶液對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染,如:100µl/孔(96孔板),室溫3~5min。用PBS清洗細(xì)胞2次,每次5min。

10)于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察,選擇Alexa FluorTM 488激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=493/517nm)和/或DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=364/454nm)。

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