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NP40裂解液(帶抑制劑)

簡(jiǎn)要描述:NP40裂解液(帶抑制劑)對(duì)胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用,有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。

  • 產(chǎn)品型號(hào):AP01L054
  • 廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家
  • 更新時(shí)間:2024-08-06
  • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:2020

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌CAS/
分子式/純度/
分子量/貨號(hào)AP01L054
規(guī)格100ml供貨周期現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)
NP40裂解液 (帶抑制劑)

產(chǎn)品描述
  NP40裂解液(帶抑制劑)是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液,主要成分為50 mM Tris(pH7.4),150 mM NaCl,1% NP-40以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多種抑制。對(duì)胞漿亞組分、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用,有利于胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子的提取。適用于常規(guī)的Western、IP和co-IP等實(shí)驗(yàn)蛋白樣品的制備。
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產(chǎn)品名稱(chēng)

貨號(hào)

規(guī)格

價(jià)格

NP40裂解液(帶抑制劑)

AP01L054

100 mL

228

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品組成包裝規(guī)格
AP01L054NP40裂解液100 mL
磷酸酶抑制劑2*1 mL
PMSF1 mL
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)一份

保存方法
  裂解液4℃保存,其余-20℃保存,保質(zhì)期一年。
使用方法

1.對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品
(1) 融解NP-40裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的終濃度為1mM。
(2) 細(xì)胞裂解

對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1~2秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。
對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,按照6孔板每孔細(xì)胞加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液,混勻,充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50~100萬(wàn)細(xì)胞/管,然后再裂解。具體NP-40裂解液的使用量參照表1。

(3) 充分裂解后,10000~14000rpm離心3~5 min,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

2. 對(duì)于組織樣品
(1) 把組織*切成細(xì)小的碎片;
(2) 融解NP-40裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的終濃度為1mM。
(3) 按照每20 mg組織加入150~250 μL裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
(4) 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
(5) 充分裂解后,10000~14000 rpm離心3~5 min,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項(xiàng)

1.用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品,含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測(cè)定蛋白濃度。
2.通常6孔板每孔細(xì)胞加入150
μL裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。
3.如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過(guò)強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。

然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

表1; NP-40裂解液的使用量
樣品種類(lèi)樣品來(lái)源收獲細(xì)胞數(shù)RIPA用量可制備樣品數(shù)
細(xì)胞6孔板2.5*106150-250 μL400-600
60 mm培養(yǎng)板5.2*106300-500 μL200-300
90 mm培養(yǎng)板12.2*106500-1000 μL100-200
25 cm2培養(yǎng)瓶5*106300-500 μL200-300
75 cm2培養(yǎng)瓶2*1071000-2000 μL50-100
組織20 mg組織塊
150-250 μL400-600

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